Analisa Mikrobiologi
PT. TIRTA INVESTAMA, Wonosobo
Pelaksana lab bertugas melakukan analisa mikrobiologi terhadap kemungkinan resiko kontaminasi mikrobia pada air baku, kemasan, produk, ruangan dan personil.
Untuk melaksanakan tugasnya pelaksana lab menggunakan empat media untuk pertumbuhan spesifik mikrobia pada cawan petri, yaitu :
a. Bakteri, menggunakan media Standar Plate Count Agar (SPCA)
Cara membuatnya yaitu dengan melarutkan 23,5 gram dalam 1 liter aquadest steril.
b. Colliform, menggunakan media Violet Red Bile Agar (VRBA)
Cara membuatnya yaitu dengan melarutkan 38,5 gram dalam 1 liter aquadest steril.
c. Jamur, menggunakan media Sabourud Dextrose Agar (SDA)
Cara membuatnya yaitu dengan melarutkan 65 gram dalam 1 liter aquadest steril.
d. Pseudomonas Aeroginosa, menggunakan media Centrimide Agar (CA).
Cara membuatnya yaitu dengan melarutkan 44,5 gram dalam 1 liter aquadest steril.
Waktu inkubasi setiap mikrobia berbeda-beda, yaitu :
a. Bakteri
Waktu inkubasi selama 24 jam, koloni membentuk bercak putih.
b. Jamur
Waktu inkubasi selama 3 hari, koloni membentuk bercak putih kehitaman (abu-abu).
c. PA
Waktu inkubasi selama 2 hari, koloni berwarna kehijauan.
d. Bakteri
Waktu inkubasi selama 24 jam, koloni berwarna merah muda.
Terdapat 2 macam sterilisasi yang dilakukan dalam laboratorium, yaitu :
a. Sterilisasi basah
Menggunakan autoclave , suhu 121o C, bertekanan 1 atm selama 15 menit.
Bahan yang di sterilkan : media, aquadest, stick swab, jas, topi, dan jas untuk operator filler, storage cup dan thermoforming.
b. Sterilisasi kering
Menggunakan oven, suhu 150o C selama 4 jam.
Bahan yang disterilkan : tabung reksi, cawan petri, botol reagen, pipet dan peralatan tahan suhu tinggi.
Prosedur analisa mikrobiologi yang dilakukan oleh pelaksana laboratorium QC :
a. Cup setelah dicuci
Metode : taburan
Media :
· Media SPCA
· Media VBRA
· Media SDA
· Media CA
Ø Alat :
· Cotton swab steril
· Cawan petri steril
· Pipet steril
Ø Cara kerja :
1. Letakan tutup botol (cup) dengan permukaan dalamnya mengahadap ke atas
2. Celupkan cotton swab ke dalam wadah yang yang berisi ± 4 ml aquadest steril,kemudian usapkan swab tersebut pada seluruh permukaan dalam tutup sebanyak 2 kali putaran. Tutup di pegang dengan menggunakan pinset
3. Masukkan kembali cotton swab kedalam wadah yang berisi aquadest steril tersebut, dikocok kemudian tuangkan seluruh isinya ke dalam cawan petri
4. Tuangkan 10 ml medium kedalam cawan petri, putar sampai homogen biarkan padat
5. Inkubasi pada suhu yang sesuai dengan kebutuhan (± 350 C )
6. Hitung koloni spesifik yang tumbuh
Ø Perhitungan :
· Total mikroba/cm2 permukaan dalam tutup botol =
· X = jumlah mikroba terhitung
· L = luas permukaan dalam tutup botol (± 96 cm2)
b. Botol kosong
Yaitu botol kosong yang telah dicuci dengan mesin washer sebelum diisi dalam filler.
Ø Metode : filtrasi
Ø Media : media SPCA, VRBA, SDA, dan PC
Ø Alat :
· membrane filter 0,45 mikronsteril
· filtration unit dengan corong dan filter holder yang telah disterilkan
· cawan petri steril
· lampu spirtus
· pinset steril
· aliminium foil
Ø Cara kerja :
1. aquadest ke dalam botol ± 700 ml.
2. Tutup botol dengan menggunakan aluminium foil steril.
3. Kocok air dalam botol sampai seluruh permukaannya tersentuh oleh aquadest dan masukkan ke dalam Erlenmeyer steril.
4. Pasang membrane filter pada filter holder dengan menggunakan pinset.
5. Tuangkan air dalam Erlenmeyer (masing-masing 100 ml untuk analisa jamur dan PA, sedangkan untuk bakteri dan colliform masing-masing 250 ml) ke dalam corong filtration unit , saring sampai habis.
6. Ambil membrane filter dari filter holder dan letakkan pada permukaan media yang sesuai secara aseptis.
7. Inkubasikan pada pada suhu yang sesuai dengan kebutuhan.
8. Hitung koloni spesifik yang tumbuh.
Ø Perhitungan : total mikroba/ml kapasitas botol =
Volume botol 5 gallon = ± 19 ml.
c. Perendam tutup cup
Untuk analisa bakteri dilakukan pengujian secara taburan sedangkan PA dan coliform secara filtrasi.
Prosedur kerjanya adalah :
1. Bakteri
Ø metode : taburan
Ø media : SPCA
Ø alat :
- cawan petri
- pipet steril
- pinset steril
- lampu spiritus
Ø cara kerja :
1. ambil ± 5 ml air rendam cup dengan menggunakan pipet kemudian masukkan ke dalam cawan petri steril.
2. Tuangkan 10 ml medium ke dalam cawan petri , putar sampai homogen, biarkan menjadi padat.
3. Inkubasi pada suhu yang sesuai dengan kebutuhan (± 350 C )
4. Hitung koloni spesifik yang tumbuh.
2. PA dan coliform
Ø Metode : filtrasi
Ø Media : VRBA dan CA
Ø Alat :
- Membrane filter 0.45 mikron steril
- Filtration unit dengan corong dan filter holder yang telah di sterilkan.
- Cawan petri steril
- Lampu spiritus
- Pinset steril
- Alumunium
Ø Cara kerja:
1. Tuangkan ± 350 ml air rendam cup ke dalam erlemeyer steril secara aseptic
2. Pasang membran filter pada filter holder dengan menggunkan pinset.
3. Tuangkan air dalam erlemeyer (masing-masing 100 ml untuk analisa PA, sedangkan untuk coliform 250 ml ) ke dalam corong filtration unit, saring sampai habis.
4. Ambil membrane filter dari filter holder dan letakkan pada permukaan media yang sesuai dengan aseptic.
5. Inkubasi pada suhu yang sesuai dengan kebutuhan.
6. Hitung koloni spesifik yang tumbuh.
d. Cup kosong dari OMV dan GABLER dengan jumlah sampel masing-masing 6 pcs
Ø Metode : filtrasi
Ø Media : SPCA, VRBA, SDA, dan CA
Ø Alat :
- Membrane filter 0.45 mikron steril
- Filtration unit dengan corong dan filter holder yang telah di sterilkan
- Cawan petri steril
- Lampu steril
- Pinset steril
- Alumunium foil
Ø Cara kerja :
1. Tuangkan 100 ml aquadest steril ke dalam cup
2. Tutp cup dengan menggunakan alumunium foil steril
3. Kocok air dalm cup sampai seluruh permukaannya tersentuh oleh aquadest steril dan masukkan k dalam erlemeyer steril
4. Pasang menmbran filter pada filter holder denagn menggunakan pinset
5. Tuangkan air dalam erlemeyer ke dalam corong filtration unit saring sampai habis
6. Ambil membaran filter dari filter holder dan letakkan pada permukaan media yang sesuai secara aseptic
7. Inkubasi pada suhu sesuai dengan kebutuhan
8. Hitung koloni spesifik ynag tumbuh
e. Cup kosong dari filler 240 ml line 1 dan 2 denagn jumlah sampel masing-masing 6 pcs
Ø Metode : filtrasi
Ø Media : SPCA, VRBA,SDA,CA
Ø Alat :
- Merman filter 0.45 mikron steril
- Filtration unit dengan corong dan filter holder yang telah disterilakan
- Cawan petri steril
- Lampu spiritus
- Pinset steril
- Alumunium steril
Ø Cara kerja :
1. Tuangkan 100 ml aquadest steril ke dalam cup
2. Tutup mulut cup dengan alumunium foil steril
3. Kocok air dalam cup sampai seluruh permukaan tersentuh oleh aquadest steril dan masukkan ke dalam erlemeyer steril
4. Pasang membrane filter pada filter holder dengan menggunakan pinset
5. Tuangkan air dalam erlemeyer ke dalam corong filtration unit sarung sampai habis
6. Ambil membrane filter dari filter holder dan letakkan pada permukaan media yang sesuai secara aseptic
7. Inkubasi pada suhu yang sesuai dengan kebutuhan
8. Hitung koloni spesifik yang tumbuh
f. Lid
Ø Media : taburan
Ø Media : SPCA, VRBA, SDA, CA
Ø Alat ;
- Cooton swab steril
- Cawan petri steril
- Pinset steril
- Pipet steril
- Lampu spiritus
Ø Cara kerja :
1. Bawa 1 roll lid letakkan di depan laminar flow/enkassh, buka pembungkusnya secara aseptic, swab langsung dioleskan pada lid, lid di pegang dengan pinset.
2. Celupkan cotoon swab ke dalam wadah yang berisi ± 4 ml aquadest steril, kemudian tuangkan seluruh isinya ke dalam cawan petri
3. Tuuangakn 10 ml medium ke dalam cawan petri, putar sampai homogeny, biarkan menjadi padat
4. Inkubasi sesuai suhu yang di butuhkan
5. Hitung koloni secara spesifik yang tumbuh
Ø Perhitungan
Total mikroba/cm2 permukaan dalam lid =
X = jumlah mikroba terhitung
L = luas permukaan dalam lid (± 42 cm2)
g. Air water treatment (air sumber, catridge 1 dan 2, finish tank )
a. Bakteri
Ø Metode : taburan
Ø Media : SPCA
Ø Alat :
- Cawan petri steril
- Pinset steril
- Pipet steril
- Lampu spiritus
Ø Cara kerja :
1. Ambil ± 5 ml air WT dengan menggunakan pipet, kemudian masukkan ke dalam cawan petri
2. Tuuangakn 10 ml medium ke dalam cawan petri, putar sampai homogeny, biarkan menjadi padat
3. Inkubasi sesuai suhu yang di butuhkan
4. Hitung koloni secara spesifik yang tumbuh
b. PA dan coliform
Ø Metode : filtrasi
Ø Media : VRBA,SDA,CA
Ø Alat :
- Merman filter 0.45 mikron steril
- Filtration unit dengan corong dan filter holder yang telah disterilakan
- Cawan petri steril
- Lampu spiritus
- Pinset steril
- Alumunium steril
Ø Cara kerja :
1. Tuangkan ± 350 ml air rendam cup ke dalam erlemeyer steril secara aseptic
2. Pasang membran filter pada filter holder dengan menggunkan pinset.
3. Tuangkan air dalam erlemeyer (masing-masing 100 ml untuk analisa PA, sedangkan untuk coliform 250 ml ) ke dalam corong filtration unit, saring sampai habis.
4. Ambil membrane filter dari filter holder dan letakkan pada permukaan media yang sesuai dengan aseptic.
5. Inkubasi pada suhu yang sesuai dengan kebutuhan.
6. Hitung koloni spesifik yang tumbuh.
h. Ruangan
Pengujian dilakukan setiap awal produksi pada ruangan yhermoforming (OMV dan GABLER) , storage, filler gallon line 1 dan 2 , filler 240 ml line 1 dan 2
Ø Cara kerja :
1. Siapkan cawan petri yang sudah berisi masing-masing media untuk bakteri,jamur,coliform,dan PA
2. Letakkan pada sudut ruangan ( membentuk segitiga ) masing-masing 4 cawan petri (B,J,PA,C)
3. Tunggu selama 30 menit, ambil, dan inkubasikan pada suhu ± 350 C
4. Hitung koloni yang tumbuh
i. Personil
Pengujian dilakukan setiap awal produksi pada ruangan yhermoforming (OMV dan GABLER) , storage, filler gallon line 1 dan 2 , filler 240 ml line 1 dan 2
Ø Cara kerja :
1. Siapkan 3 contoh swab steril , 3 cawan petri,
2. Tangan operator disemprot denagn alcohol, kemudian oleskan ketiga cotton swab pada tngan tersebut
3. Untuk kedua cotton swab masukkan ke dalam masinng-masing tabung reaksi yang berisi media untuk PA dan jamur, kemudian masing- massing dituangkan kedalam cawan petri steril dan ditutup .sedangkan 1 cotton swab langsung dioleskan pada media coliform dalam cawan petri
4. Hitung koloni yang tumbuh
j. Produk 5 galon dan 240 ml
Pengujian dilakukan setiap awal dan akhir produksi serta setelah 5 hari di isolasi
a. Bakteri
Ø Metode : taburan
Ø Media : SPCA
Ø Alat :
- Cawan petri steril
- Pinset steril
- Pipet steril
- Lampu spiritus
Ø Cara kerja :
1. Ambil ± 5 ml air produk dengan menggunakan pipet, kemudian masukkan ke dalam cawan petri
2. Tuuangakn 10 ml medium ke dalam cawan petri, putar sampai homogeny, biarkan menjadi padat
3. Inkubasi sesuai suhu yang di butuhkan
4. Hitung koloni secara spesifik yang tumbuh
c. PA dan coliform
Ø Metode : filtrasi
Ø Media : VRBA,SDA,CA
Ø Alat :
- Merman filter 0.45 mikron steril
- Filtration unit dengan corong dan filter holder yang telah disterilakan
- Cawan petri steril
- Lampu spiritus
- Alumunium steril
- Pinset steril
Ø Cara kerja :
1. Tuangkan ± 350 ml air rendam cup ke dalam erlemeyer steril secara aseptic
2. Pasang membran filter pada filter holder dengan menggunkan pinset.
3. Tuangkan air dalam erlemeyer (masing-masing 100 ml untuk analisa PA, sedangkan untuk coliform 250 ml ) ke dalam corong filtration unit, saring sampai habis.
4. Ambil membrane filter dari filter holder dan letakkan pada permukaan media yang sesuai dengan aseptic.
5. Inkubasi pada suhu yang sesuai dengan kebutuhan.
6. Hitung koloni spesifik yang tumbuh.
